包裝與品牌:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 品牌
|
血液基因組大量提取試劑盒 | 50次/100次 | 一研 |
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品說明
本產(chǎn)品可用于全血樣本的基因組DNA的純化。純化原理是首先利用紅細(xì)胞裂解液先去除血液中的紅細(xì)胞*,細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA,由硅膠膜柱可逆吸附體系內(nèi)的基因組DNA,經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后,用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產(chǎn)品適用于未凝固全血,以及經(jīng)各種抗凝劑(EDTA、肝素、檸檬酸)處理過的全血樣本。一次可從5-10 ml全血中提取到30-200 μg高純度基因組DNA(OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
*本產(chǎn)品不能從全血中直接提取DNA,要去除血液中紅細(xì)胞后才能得到高濃度的基因組DNA。如要直接從全血迅速提取高純度基因組DNA,建議選擇Quick血液基因組DNA提取試劑盒(貨號(hào):N1131、N1132)。
質(zhì)量控制
純化的基因組DNA質(zhì)量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴(kuò)增鑒定。
保存條件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余試劑置于室溫(15-25℃)干燥條件下保存1年。
如果消化緩沖液DS和MS中沉淀,可在55℃加熱溶解,待恢復(fù)室溫后混勻即可使用。不會(huì)影響基因組DNA的純化效率。
操作步驟
1 取血液樣本,每5-10 ml血液加入到一只50 ml離心管中。加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液RS。漩渦振蕩或上下來回顛倒混勻。5,000 rpm離心3min,棄上清,收集白色或淡紅色沉淀,重復(fù)上訴步驟。
● 如沉淀仍然呈深紅色,表明紅細(xì)胞裂解不充分,可再加等體積紅細(xì)胞裂解液RS處理一次。
● 對(duì)于哺乳動(dòng)物全血,每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因組DNA。如從鳥類、兩棲類或更低級(jí)的動(dòng)物血液中提取基因組DNA,因其血液中紅細(xì)胞有細(xì)胞核,血液用量勿超過500 μl/離心管。每500 μl全血中可提取200 μg的基因組DNA。
2 加入5 ml消化緩沖液DS,漩渦振蕩至形成完全均一的懸浮液。
● 如需去除RNA,可加入100 μl RNase A(100 mg/ml),振蕩15秒,室溫放置5min。
3 加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS,漩渦振蕩混勻。65℃溫浴15 min。溶液應(yīng)變清亮,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
● 加入裂解液MS時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀,一般65℃放置時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明細(xì)胞裂解不徹底,可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。
4 加入5.5 ml無水乙醇,上下顛倒混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀。簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到純化柱中。12,000rpm離心1min,棄濾液。
● 此時(shí)基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
5 加入10 ml去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
● 此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質(zhì)等雜質(zhì),以獲得高質(zhì)量基因組DNA。
6 加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。
7 加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
8 12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(PCR或酶切)。同時(shí)利于基因組DNA充分溶解。
9 將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。
10 12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。
● 洗脫液TE可用去離子水代替,但其pH需為8.0-8.5。
● 對(duì)洗脫液TE 60℃預(yù)熱,會(huì)提高基因組DNA的產(chǎn)量。
注意事項(xiàng):
● RNA樣本保存液如出現(xiàn)沉淀,37℃加熱振蕩混勻。
● 加入RNA樣本保存液后,樣本不能立即置于-20℃或-80℃,要先4℃置放過夜,待組織充分浸潤(rùn)后再置于低溫保存。
● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中,可在37℃保存1天,25℃保存1周,4℃保存1個(gè)月,-20℃長(zhǎng)期保存;使用時(shí)請(qǐng)注意保存時(shí)限。
● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經(jīng)特殊處理,離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。
● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用,如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒,不影響試劑盒操作,不影響提取所得RNA質(zhì)量及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)。