包裝與品牌:
產品名稱 | 規格 | 品牌
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海洋動物血液基因組DNA提取試劑盒 | 50次/100次 | 一研 |
產品介紹:
● 裂解液MS中含變性劑,請不要直接接觸皮膚。
● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。
產品說明
本產品可用于海洋動物全血/體液樣本的基因組DNA的純化。純化原理是首先利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA,由硅膠膜柱可逆吸附體系內的基因組DNA,經蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質等雜質后,用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產品適用于魚類、蝦類、貝類動物全血,一次可從20 μl全血中提取到3-10 μg高純度基因組DNA(OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續實驗。
質量控制
純化的基因組DNA質量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴增鑒定。
保存條件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余試劑置于室溫(15-25℃)干燥條件下保存1年。
如果消化緩沖液DS和MS中沉淀,可在55℃加熱溶解,待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。
操作步驟
預備實驗:
取血液/體液樣本在紅細胞計數板進行細胞計數,計算其細胞數量級10x/ml,(7-x)ml就是提取基因組DNA所需的血液體積數。
1 取血液/體液樣本(7-x)ml加入到一只1.5 ml離心管中,5,000 rpm離心3min,棄上清,收集沉淀。
● 如果樣本超過1.5ml,可分次加入,離心收集沉淀,務必使離心所得的沉淀中包含105-106的細胞數。
2 加入200靗消化緩沖液DS,旋渦振蕩直至完全分散。
● 如需去除RNA,加入消化緩沖液DS后,再加入4靗 RNase A(100 mg/ml)溶液,震蕩混勻,室溫放置5min。
3 加入20靗蛋白酶K和220靗裂解液MS,漩渦振蕩混勻。65℃溫浴10min。溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
● 加入裂解液MS時可能會產生白色沉淀,一般65℃放置時會消失,不會影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不徹底
● 可能導致提取DNA量少和提取出的DNA 純度降低。
4 加入220靗無水乙醇,上下來回顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉淀,將溶液及絮狀沉全部淀轉移到純化柱中。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
● 此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
5 加入500靗去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質洗脫,以獲得高質量基因組DNA。
6 加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。
7 加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
8 12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續的酶促反應(PCR或酶切)。同時利于基因組DNA充分溶解。
9 將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加30-100靗純化液TE。室溫放置2min。
10 12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。
● 純化液TE可用去離子水代替,但其pH需為8.0-8.5。體積視質粒拷貝數多少、用戶對質粒濃度要求而定。
● 對純化液TE 進行60℃預熱,會提高基因組DNA的產量。
注意事項:
● RNA樣本保存液如出現沉淀,37℃加熱振蕩混勻。
● 加入RNA樣本保存液后,樣本不能立即置于-20℃或-80℃,要先4℃置放過夜,待組織充分浸潤后再置于低溫保存。
● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中,可在37℃保存1天,25℃保存1周,4℃保存1個月,-20℃長期保存;使用時請注意保存時限。
● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經特殊處理,離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。
● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用,如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒,不影響試劑盒操作,不影響提取所得RNA質量及其后續實驗。