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豬膀胱平滑肌細胞原代細胞的分離培養發表時間:2024-03-05 15:45 豬膀胱平滑肌細胞原代細胞的分離培養: 原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官,讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體,它們的生物性狀尚未發生很大的改變,在一定程度上可反映它們在體內的狀態,表現出來源組織或細胞的特性, 因此用于藥物實驗,尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等,是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。 (一)組織塊培養法 許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養,因為方法簡單,細胞也較容易生長。尤其是培養心肌,有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后, 即可進行傳代。 1. 設備材料 培養箱、冰箱、超凈工作臺/無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。 2. 操作步驟 (1) 在無菌條件下,取待培養的組織適量,置入小燒杯中, 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,去掉組織塊表面的血污。 (2)用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。 (3)再用Hanks 溶液反復漂洗, 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉,將燒杯傾斜,用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。 (4)用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml)的培養液再清洗,用吸管吸干后加入5ml 含20%血清的培養液。 (5)用彎頭吸管吸取組織小塊,均勻地置于培養皿內表面,吸去多余的培養液,各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋,做好標記, 置37°C 的CO2培養箱內。 (6) 2~4h 后,于超凈工作臺中,緩緩地向培養皿中加入上述含20%血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml )的培養液少量,以使組織塊浸沒在培養液中。 (7)輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱, 如無特殊情況,不必觀察。1~2 周后,可觀察到細胞從組織塊邊緣長出,形成生長暈。 (9) 一般說來,若培養液無明顯改變, 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面,即可進行傳代培養。 |
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