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大鼠食管組織提取物實驗報告

發(fā)表時間:2022-11-24 15:56

大鼠食管組織提取物實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

羊抗雞IgG (抗血清) Anti-Chicken IgG antibody produced in ... 1ML 免疫血清

兔抗雞IgG (抗血清) Anti-Chicken IgG antibody produced in ... 1ML 免疫血清

兔抗地高辛 (抗血清) Anti-Digoxin antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清

羊抗狗IgG (抗血清) Anti-Dog IgG antibody produced in goat 1ML 免疫血清

兔抗狗IgG (抗血清) Anti-Dog IgG antibody produced in rabbit 1ML 免疫血清

驢抗羊IgG (抗血清) Anti-Goat IgG antibody produced in don... 1ML 免疫血清

兔抗羊IgG (抗血清) Anti-Goat IgG antibody produced in rab... 1ML 免疫血清

兔抗豚鼠IgG (抗血清) Anti-Guinea Pig IgG antibody produced ... 1ML 免疫血清

羊抗馬IgG (抗血清) Anti-Horse IgG antibody produced in goat 1ML 免疫血清

兔抗馬IgG (抗血清) Anti-Horse IgG antibody produced in ra... 1ML 免疫血清

羊抗人白蛋白 (抗血清) Anti-Human Albumin antibody produced i... 1ML 免疫血清

兔抗人白蛋白 (抗血清) Anti-Human Albumin antibody produced i... 1ML 免疫血清

羊抗人C3 (抗血清) Anti-Human C3 antibody produced in goat 1ML 免疫血清

羊抗人纖維蛋白原 (抗血清) Anti-Human Fibrinogen produced in goat 1ML 免疫血清

兔抗人纖維蛋白原 (抗血清) Anti-Human Fibrinogen produced in rabbit 1ML 免疫血清

羊抗人IgA血清 (α鏈特異) Anti-Human IgA (α-chain spec.) produc... 1ML 免疫血清

羊抗人IgA (抗血清) Anti-Human IgA antibody produced in goat 1ML 免疫血清

兔抗人IgA (抗血清) Anti-Human IgA antibody produced in ra... 1ML 免疫血清

兔抗人IgG~Fc (抗血清) Anti-Human IgG (Fc spec.) produced in ... 1ML 免疫血清

羊抗人IgG (抗血清) Anti-Human IgG antibody produced in goat 1ML 免疫血清

兔抗人IgG (抗血清) Anti-Human IgG antibody produced in ra... 1ML 免疫血清



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