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大鼠血管組織提取物細胞處理

發表時間:2022-10-13 15:53

大鼠血管組織提取物細胞處理:

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞.png

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。凍存培養基

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養基。

1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。

2)凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

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