大鼠抗IgE受體抗體檢測(cè)ELISA試劑盒使用方法

大鼠抗IgE受體抗體檢測(cè)ELISA試劑盒使用方法:

測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀(guān)察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱(chēng)為酶放大體系。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

0.5M DTT10ml

SDS80g

SDS80g

10% SDS100ml

TEMED10ml

1M Tris-HCl,pH6.8100ml

1M Tris-HCl,pH8.8100ml

1.5M Tris-HCl,pH8.8100ml

蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)200微升

蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)1ml

Protein Ladder(非預(yù)染)100微升

預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)200微升

預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)1ml

彩色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)200微升

彩色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)600微升

Phospho-ACC (Ser79)抗體>20次

Actin抗體>40次

Actin抗體(smooth muscle specific)>20次

AIF抗體>20次

Akt抗體>10次

Phospho-Akt(Ser473)抗體>10次

Phospho-Akt(Thr308)抗體>10次

Phospho-AMPKα(Thr172)抗體>20次

Atg7抗體>20次

Phospho-ATM(Ser1981)抗體>20次

Phospho-ATR(Ser428)抗體>20次

Aurora A抗體>20次

Phospho-Aurora抗體>20次

Bad抗體>40次

Phospho-Bad(Ser112)抗體>20次