小鼠P53elisa檢測試劑盒試劑配制技巧

小鼠P53elisa檢測試劑盒試劑配制:

1、小鼠P53elisa檢測試劑盒圖酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。

2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

【實驗用途】p53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關(guān)性的基因。1979年，Lane和Crawford在感染了SV40的小鼠細胞內(nèi)分離獲得一個與SV40大T抗原相互作用的蛋白，因其分子量為53 kDa，故而取名為p53（人的基因稱為TP53）。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。