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臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒使用方法發表時間:2021-04-19 16:11 臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒使用方法: 一、樣品的準備: 方法一:LDH釋放檢測 a.根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養板中,使待檢測時細胞密度不超過80-90%滿。 b.吸去培養液,用PBS液洗滌一次。換新鮮培養液(推薦使用含1%血清的低血清培養液或適當的無血清培養液),將各培養孔分成如下幾組:包括無細胞的培養液孔(背景空白對照孔),未經藥物處理的對照細胞孔(樣品對照孔),未經藥物處理的用于后續裂解的細胞孔(樣品**酶活性對照孔),以及藥物處理的細胞孔(藥物處理樣品孔),并做好標記。按照實驗需要給予適當藥物處理(如加入0-10μl左右特定的藥物刺激,可設置不同濃度,不同處理時間,對照孔中需加入適當的藥物溶劑對照),繼續按常規培養。到預定的檢測時間點前1小時,從細胞培養箱里取出細胞培養板,在“樣品**酶活性對照孔”中加入試劑盒提供的LDH釋放試劑,加入量為原有培養液體積的10%。加入LDH釋放試劑后,反復吹打數次混勻,然后繼續在細胞培養箱中孵育。 c.到達預定時間后,將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl,加入到一新的96孔板相應孔中,隨即進行樣品測定。 方法二:細胞內總LDH的檢測 a.細胞毒性檢測:根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養孔板中,使待檢測時細胞密度不超過80-90%滿。加入不同藥物進行處理,并設置適當對照。藥物刺激完畢后,將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清,加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻),適當搖晃培養板混勻,然后繼續在細胞培養箱中孵育1小時。隨后將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl,加入到一新的96孔板相應孔中,隨即進行樣品測定。 b.細胞增殖檢測:根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養孔板中,使促進細胞增殖的藥物刺激后細胞不超過80-90%滿為宜。使用不同的藥物刺激細胞,并設置適當對照。藥物刺激完畢后,將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清,加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻),適當搖晃混勻,然后繼續在細胞培養箱中孵育1小時。隨后將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔上清液120μl,加入到一新的96孔板相應孔中,隨即進行樣品測定。 ? 注:LDH釋放檢測更加常用一些,細胞內總LDH檢測通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。 |
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