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細胞消化同樣的時間對細胞是公平的發表時間:2019-04-11 11:52 對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態好與不好至關重要的考驗。 在消化的過程中,加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是公平的。 具體操作: 1) 首先不加胰酶,倒掉舊培養基加入少量新培養基洗 1-2 遍,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。 2) 然后再加入少量新培養基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。 3)吸干凈瓶內剩余液體,加入 0.3 ml 左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入 1 ml 左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子頭里備用,加入新培養基開始吹打,吹打 2-3 遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用 2 ml 左右新培養基洗一遍與前面的混合。也可以傳入新瓶培養,以與后面及前面的做對比。 4)把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續消化剩余的貼壁牢固的細胞。也可以用新的胰酶。繼續鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養基吹打。懸液傳入新瓶培養。 5)對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話,為了細胞更好的狀態,更漂亮的樣子,必須分多批多次消化,這樣才能大限度地將胰酶對細胞的損傷降到低,保證細胞的狀態能夠優。 |
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