細胞凋亡陽性對照試劑盒接種細胞

細胞凋亡陽性對照試劑盒接種細胞

1．按常規(guī)胰酶消化法消化匯合的單層細胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。

2．200g離心5分鐘收集細胞沉淀。

3．用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸浮液并計數(shù)。

4．將細胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據(jù)細胞的生長速度決定)，如果不知道生長數(shù)度，一般可以稀釋到1×10個/mL。

5．將足夠量的細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。

6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞，則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。

?注意：一定要把細胞加在孔的正中，否則細胞會聚集在孔的角落處，影響試驗。

7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細胞+MTT對照(用于測OD時調(diào)零)，第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應對第11列反應的影響。

8．按常規(guī)細胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細胞進入指數(shù)生長期。