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人遺傳小腦共濟失調PCR檢測試劑盒產品特點

發表時間:2020-02-20 16:11

人遺傳小腦共濟失調PCR檢測試劑盒產品特點:

PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。因此,引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。

要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構,就要避開它。如這一段不能形成二級結構,那就可以在這一區域設計引物。

現在可以在這一保守區域里設計一對引物。一般引物長度為15-30堿基,擴增片段長度為100-600堿基對。

讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%。而且四種堿基的分布隨機。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設計的就不合理。應重新尋找區域設計引物。

同時引物之間也不能有互補性,一般一對引物間不應多于4個連續堿基的互補。

引物確定以后,可以對引物進行必要的修飾,例如可以在引物的5′端加酶切位點序列;標記生物素、熒光素、等,這對擴增的特異性影響不大。但3′端絕對不能進行任何修飾,因為引物的延伸是從3′端開始的。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位,因為密碼子第3位易發生簡并,會影響擴增的特異性與效率。


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