常用免疫組織化學方法的原理

常用免疫組織化學方法的原理：

1. 免疫熒光細胞化學技術：將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后會發出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。

2. 免疫酶細胞化學技術：是目前免疫組織化學研究中zui常用的技術．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。

3. 免疫膠體金技術：就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。

抗體修復方式:

修復液：0.01M 枸櫞酸（pH6.0）或者0.05M EDTA（pH8.0）

抗體修復方法：

方法1：沸水浴修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環境，保持外部沸騰狀態15min，自然冷卻至室溫；

方法2：微波修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷卻至室溫。

抗體溶解方法：方法1：我們的抗體（凍干粉）已經包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐劑（疊氮鈉或慶大霉素），您只需要加入滅菌的雙蒸水就行了。抗體溶解后，置于-20℃保存，可以分裝后使用，避免反復凍融，可保證至少1年有效；

方法2：也可以只加入一半體積的雙蒸水，再用一半體積的甘油補足，置于-20℃保存，這樣抗體不會凍，有利于抗體的穩定。

后續試驗時，再使用對應的緩沖液稀釋成工作液，即用即配。