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培養細胞的具體常規觀察發表時間:2019-12-09 16:08 培養細胞的常規觀察 細胞接種或傳代以后,實驗者每天或至多間隔1~2d,要對細胞做常規性檢查。觀察細胞形態和生長情況以及培養的pH變化、有無污染等。根據細胞動態變化,做換液或傳代處理,如發現異常情況應及時采取措施。 1. 細胞形態 生長狀態良好的細胞,在一般顯微鏡下觀察時可見,細胞透明度大、折光性強、輪廓不清。細胞生長不良時,輪廓增強,胞質中常出現空泡、脂滴和其他顆粒狀物,細胞之間空隙加大,細胞形態可變得不規則甚至失去原有特點,如上皮細胞變成類上皮細胞等。某些染料當細胞死亡時能透過變性的胞膜與解體的細胞核DNA結合,而令其著色。因而常用臺盼藍(trypan blue) 鑒別細胞死活,活細胞不著色,死細胞核呈藍色。 2. 細胞生長 初代培養或傳代的細胞懸液接種以后,經過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細胞生長,一周內便可連接成片。接種細胞長滿瓶壁后,應及時做再培養。否則由于營養物消耗和代謝積累,細胞即進入停止期或退化期。此時細胞輪廓增強,細胞內常出現顆粒狀堆積物,為膨脹的線粒體,細胞質呈空泡化,細胞變圓、粗糙,嚴重時細胞從瓶壁脫落,只有及時再做傳代處理,才能使細胞繼續生長繁殖。
3. 營養液 正常情況下,培養液呈桃紅色。如果細胞維持在pH6.5~6.6條件下,細胞會脫落死亡。當培養液酸化變黃時,說明培養液中代謝產物已堆積到一定量,需要更換新鮮培養液。培養液中如加Hepes或用5%CO2溫箱培養可使pH維持相對穩定。更換營養液的時間,可依營養物的消耗而定,細胞生長旺盛時2~3d換一次,生長緩慢時,3~4d亦可。要特別注意各種細胞對pH值要求是不一樣的。 4. 微 生物 污染 微 生物 污染培養 細胞培養 物后會出現pH值改變,培養液呈現混濁狀。細菌感染后,由于細菌的運動,光鏡觀察可見有微閃光;真菌感染則在鏡下見許多細絲狀菌絲,有時還密集有群集孢子;支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。細胞污染以后一般應當廢棄,對于重要的細胞株,可以參考相關專著,介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實驗、珍貴的細胞,至少由兩個實驗人員獨立培養操作,或由一個人分次(不同時)操作。除培養實驗室的衛生條件外,空氣中的濕度與微生物污染關系密切。重要的、周期長的實驗盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進行。 |
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