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小鼠內皮祖細胞使用操作發表時間:2019-11-15 15:31 小鼠內皮祖細胞使用操作: 取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置2-3小時以穩定細胞狀態,然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。 2、細胞傳代: 1)細胞生長至覆蓋培養瓶的90%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次; 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1500rpm離心5min; 3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養; 4)待細胞完全貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。 3、細胞凍存: 1)細胞生長至覆蓋培養瓶的90%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次; 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1500rpm離心5min; 3)用適量的凍存液(基礎培養基:FBS:DMSO=5:4:1)重懸細胞,并放置于凍存管中; 4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。 4、細胞復蘇: 1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁; 2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中, 1500rpm離心5min; 3)棄上清,沉淀用5ml完全培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養; 4)第二天,換用新鮮完全培養基繼續培養。 |
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